page_banner

Naujas trombocitais turtingos plazmos (PRP) terapijos supratimas – II dalis

Šiuolaikinis PRP: „Klinikinis PRP“

Per pastaruosius 10 metų PRP gydymo schema labai pasikeitė.Atlikdami eksperimentinius ir klinikinius tyrimus, dabar geriau suprantame trombocitų ir kitų ląstelių fiziologiją.Be to, keli aukštos kokybės sistemingi vertinimai, metaanalizė ir atsitiktinių imčių kontroliuojami tyrimai parodė PRP biotechnologijos veiksmingumą daugelyje medicinos sričių, įskaitant dermatologiją, širdies chirurgiją, plastinę chirurgiją, ortopedinę chirurgiją, skausmo valdymą, stuburo ligas ir sporto mediciną. .

Dabartinė PRP charakteristika yra absoliuti jo trombocitų koncentracija, kuri nuo pradinio PRP apibrėžimo (įskaitant trombocitų koncentraciją, didesnę nei pradinė vertė) keičiasi iki daugiau nei 1 × 10 6/µl arba maždaug 5 kartus didesnė už minimalią trombocitų koncentraciją trombocituose pradinė linija.Išsamioje apžvalgoje Fadadu ir kt.Įvertintos 33 PRP sistemos ir protokolai.Kai kurių iš šių sistemų pagaminto galutinio PRP preparato trombocitų skaičius yra mažesnis nei viso kraujo.Jie pranešė, kad naudojant vieno sukimo rinkinį (Selphyl®) PRP trombocitų faktorius padidėjo iki 0,52.Priešingai, dvigubo sukimosi EmCyte Genesis PurePRPII ® Prietaiso sukurta trombocitų koncentracija yra didžiausia (1,6 × 10 6 /µL).

Akivaizdu, kad in vitro ir gyvūnų metodai nėra ideali tyrimų aplinka sėkmingai transformuotis į klinikinę praktiką.Panašiai ir prietaisų palyginimo tyrimas nepatvirtina sprendimo, nes jie rodo, kad trombocitų koncentracija tarp PRP prietaisų labai skiriasi.Laimei, naudodamiesi proteomika pagrįsta technologija ir analize galime geriau suprasti PRP ląstelių funkcijas, kurios turi įtakos gydymo rezultatams.Prieš pasiekdamas sutarimą dėl standartizuotų PRP preparatų ir formų, PRP turėtų vadovautis klinikinėmis PRP formulėmis, kad būtų skatinami esminiai audinių atstatymo mechanizmai ir progresuojantys klinikiniai rezultatai.

 

Klinikinė PRP formulė

Šiuo metu efektyvus klinikinis PRP (C-PRP) apibūdinamas kaip sudėtinga autologinių daugialąsčių komponentų kompozicija mažo tūrio plazmoje, gautoje iš dalies periferinio kraujo po centrifugavimo.Po centrifugavimo PRP ir jo ne trombocitų ląstelių komponentai gali būti išgaunami iš koncentravimo įrenginio pagal skirtingus ląstelių tankius (iš kurių trombocitų tankis yra mažiausias).

Klinika-PRP

Naudokite PurePRP-SP ® Ląstelių tankio atskyrimo įranga (EmCyte Corporation, Fort Myers, FL, JAV) po dviejų centrifugavimo procedūrų buvo naudojama visam kraujui.Po pirmojo centrifugavimo viso kraujo komponentas buvo padalintas į du pagrindinius sluoksnius: trombocitų (liesos) plazmos suspensiją ir raudonųjų kraujo kūnelių sluoksnį.A dalyje antrasis centrifugavimo etapas buvo baigtas.Faktinis PRP tūris gali būti išgautas, kad būtų galima naudoti pacientui.Padidinimas B rodo, kad įrangos apačioje yra organizuotas daugiakomponentis eritrocitų nusėdimo rudas sluoksnis (pavaizduotas mėlyna linija), kuriame, remiantis tankio gradientu, yra didelė trombocitų, monocitų ir limfocitų koncentracija.Šiame pavyzdyje pagal C-PRP paruošimo protokolą, kai neutrofilų skaičius yra mažas, bus išskirtas minimalus neutrofilų (<0,3%) ir eritrocitų (<0,1%) procentas.

 

Trombocitų granulės

Ankstyvajame klinikiniame PRP taikyme α-granulės yra dažniausiai minima trombocitų vidinė struktūra, nes jose yra krešėjimo faktorių, daug PDGF ir angiogeninių reguliatorių, tačiau jos turi mažai trombogeninės funkcijos.Kiti veiksniai apima mažiau žinomus chemokinų ir citokinų komponentus, tokius kaip trombocitų faktorius 4 (PF4), bazinis baltymas prieš trombocitus, P-selektinas (integrino aktyvatorius) ir chemokinas RANTES (reguliuojamas aktyvacijos, ekspresuoja normalias T ląsteles ir, tikėtina, išskiriantis).Bendra šių specifinių trombocitų granulių komponentų funkcija yra įdarbinti ir aktyvuoti kitas imunines ląsteles arba sukelti endotelio ląstelių uždegimą.

Trombocitai-granulės

 

Tankūs granuliuoti komponentai, tokie kaip ADP, serotoninas, polifosfatas, histaminas ir adrenalinas, netiesiogiai naudojami kaip trombocitų aktyvacijos ir trombozės reguliatoriai.Svarbiausia, kad daugelis šių elementų atlieka imuninių ląstelių modifikavimo funkciją.Trombocitų ADP atpažįsta P2Y12ADP receptorius dendritinėse ląstelėse (DC), taip padidindamas antigeno endocitozę.DC (antigeną pateikianti ląstelė) yra labai svarbi T ląstelių imuninio atsako inicijavimui ir apsauginio imuninio atsako kontrolei, kuri susieja įgimtą imuninę sistemą ir adaptyviąją imuninę sistemą.Be to, trombocitų adenozino trifosfatas (ATP) siunčia signalus per T ląstelių receptorių P2X7, todėl CD4 T pagalbinės ląstelės labiau diferencijuojamos į priešuždegimines T helper 17 (Th17) ląsteles.Kiti tankūs trombocitų granulių komponentai (pvz., glutamatas ir serotoninas) atitinkamai sukelia T ląstelių migraciją ir padidina monocitų diferenciaciją iki DC.PRP šie imunomoduliatoriai, gauti iš tankių dalelių, yra labai praturtinti ir turi svarbių imuninių funkcijų.

Tiesioginės ir netiesioginės galimos trombocitų ir kitų (receptorių) ląstelių sąveikos skaičius yra didelis.Todėl PRP taikymas vietinėje patologinio audinio aplinkoje gali sukelti įvairius uždegiminius efektus.

 

Trombocitų koncentracija

C-PRP turi turėti klinikines koncentruotų trombocitų dozes, kad būtų pasiektas teigiamas terapinis poveikis.Trombocitai C-PRP turėtų skatinti ląstelių dauginimąsi, mezenchiminių ir neurotrofinių faktorių sintezę, skatinti chemotaksinių ląstelių migraciją ir stimuliuoti imunoreguliacinį aktyvumą, kaip parodyta paveikslėlyje.Trombocitų koncentracija

 

Suaktyvinti trombocitai, PGF ir adhezijos molekulių išsiskyrimas tarpininkauja įvairioms ląstelių sąveikoms: chemotaksei, ląstelių adhezijai, migracijai ir ląstelių diferenciacijai bei reguliuoja imuninės sistemos reguliavimo veiklą.Šios trombocitų ląstelių ir ląstelių sąveikos prisideda prie angiogenezės ir uždegiminio aktyvumo bei galiausiai skatina audinių atstatymo procesą.Santrumpos: BMA: kaulų čiulpų aspiratas, EPC: endotelio progenitorinės ląstelės, EC: endotelio ląstelės, 5-HT: 5-hidroksitriptaminas, RANTES: aktyvuotas normalios T ląstelių ekspresijos ir spėjamos sekrecijos reguliavimas, JAM: jungties adhezijos molekulės tipas, CD40L: klasteris 40 ligandas, SDF-1 α: Stromos ląstelių kilmės faktorius-1 α, CXCL: chemokino (CXC motyvas) ligandas, PF4: trombocitų faktorius 4. Pritaikyta iš Everts ir kt.

Marksas buvo pirmasis asmuo, įrodęs, kad kaulų ir minkštųjų audinių gijimas pagerėjo, o minimalus trombocitų skaičius buvo 1 × 10 6 /µL. Šie rezultatai buvo patvirtinti atliekant juosmens susiliejimo per tarpslankstelinę angą tyrimą, kai trombocitų dozė buvo didesnė nei 1,3 × Esant 106 trombocitams / µl, šis tyrimas parodė daugiau susiliejimo.Be to, Giusti ir kt.Atskleista 1,5 × audinių atstatymo mechanizmas, kai dozė yra 109, reikalauja trombocitų / ml, kad sukeltų funkcinę angiogenezę per endotelio ląstelių aktyvumą.Pastarajame tyrime didesnės koncentracijos sumažino trombocitų angiogenezės potencialą folikuluose ir aplink juos.Be to, ankstesni duomenys parodė, kad PRP dozė taip pat turės įtakos gydymo rezultatams.Todėl, siekiant reikšmingai sukelti angiogenezės reakciją ir stimuliuoti ląstelių proliferaciją bei ląstelių migraciją, C-PRP turi būti bent 7,5 5 ml PRP gydymo buteliuke × 10 9 gali tiekti trombocitus.

Be priklausomybės nuo dozės, atrodo, kad PRP poveikis ląstelių aktyvumui labai priklauso nuo laiko.Sophie ir kt.Šie rezultatai rodo, kad trumpalaikis žmogaus trombocitų lizatų poveikis gali paskatinti kaulų ląstelių proliferaciją ir chemotaksę.Priešingai, ilgalaikis PRP poveikis sumažins šarminės fosfatazės ir mineralų susidarymo lygį.

 

Raudonasis kraujo kūnelis

Raudonieji kraujo kūneliai yra atsakingi už deguonies transportavimą į audinius ir anglies dioksido pernešimą iš audinių į plaučius.Jie neturi branduolio ir yra sudaryti iš hemo molekulių, kurios jungiasi su baltymais.Raudonųjų kraujo kūnelių geležies ir hemo komponentai skatina deguonies ir anglies dioksido derinį.Paprastai raudonųjų kraujo kūnelių gyvavimo ciklas yra apie 120 dienų.Juos iš kraujotakos pašalina makrofagai per procesą, vadinamą RBC senėjimu.PRP mėginiuose esantys raudonieji kraujo kūneliai gali būti pažeisti šlyties sąlygomis (pavyzdžiui, kraujavimo iš viso kraujo operacijos, imuninio proceso, oksidacinio streso ar netinkamos PRP koncentracijos schemos).Todėl eritrocitų ląstelių membrana suyra ir išskiria toksinį hemoglobiną (Hb), matuojant plazmos laisvu hemoglobinu (PFH), hemu ir geležimi.].PFH ir jo skilimo produktai (hemas ir geležis) kartu sukelia žalingą ir citotoksinį poveikį audiniams, sukelia oksidacinį stresą, azoto oksido praradimą, uždegiminių takų aktyvavimą ir imunosupresiją.Šis poveikis ilgainiui sukels mikrocirkuliacijos sutrikimą, vietinį kraujagyslių susiaurėjimą ir kraujagyslių pažeidimą, taip pat rimtus audinių pažeidimus.

Svarbiausia, kad į audinį patekus į audinį RBC, kuriame yra C-PRP, jis sukels vietinę reakciją, vadinamą eriptoze, kuri paskatins veiksmingo citokinų ir makrofagų migracijos inhibitorių išsiskyrimą.Šis citokinas slopina monocitų ir makrofagų migraciją.Jis skleidžia stiprius priešuždegiminius signalus aplinkiniams audiniams, slopina kamieninių ląstelių migraciją ir fibroblastų dauginimąsi ir sukelia reikšmingą vietinių ląstelių disfunkciją.Todėl svarbu apriboti eritrocitų užterštumą PRP preparatuose.Be to, raudonųjų kraujo kūnelių vaidmuo audinių regeneracijoje niekada nebuvo nustatytas.Tinkamas C-PRP centrifugavimas ir paruošimo procesas paprastai sumažins ar net pašalins raudonųjų kraujo kūnelių buvimą, taip išvengiant neigiamų hemolizės ir policitemijos pasekmių.

 

Leukocitai C-PRP

Baltųjų kraujo kūnelių buvimas PRP preparatuose priklauso nuo gydymo įrangos ir paruošimo schemos.Plazmos pagrindu pagamintoje PRP įrangoje baltieji kraujo kūneliai visiškai pašalinami;Tačiau baltieji kraujo kūneliai buvo žymiai koncentruoti PRP preparate eritrocitų nusėdimo rudajame sluoksnyje.Dėl savo imuninių ir šeimininko gynybos mechanizmų baltieji kraujo kūneliai labai veikia vidinę ūminių ir lėtinių audinių būklių biologiją.Šios funkcijos bus toliau aptariamos toliau.Todėl specifinių leukocitų buvimas C-PRP gali sukelti reikšmingą poveikį ląstelėms ir audiniams.Tiksliau, skirtingose ​​PRP eritrocitų nusėdimo rudai geltono sluoksnio sistemose naudojamos skirtingos paruošimo schemos, todėl PRP susidaro skirtinga neutrofilų, limfocitų ir monocitų dalis.Eozinofilų ir bazofilų PRP preparatuose išmatuoti negalima, nes jų ląstelių membranos yra per trapios, kad atlaikytų išcentrines apdorojimo jėgas.

 

Neutrofilai

Neutrofilai yra būtini leukocitai daugelyje gydymo būdų.Šie keliai derinami su antimikrobiniais baltymais, esančiais trombocituose, sudarydami tankų barjerą nuo invazinių patogenų.Neutrofilų buvimas nustatomas pagal C-PRP gydymo tikslą.Gali prireikti padidėjusio audinių uždegimo lygio taikant lėtinės žaizdos PRP bioterapiją arba taikant kaulams augti ar gydyti.Svarbu tai, kad keliuose modeliuose buvo aptiktos papildomos neutrofilų funkcijos, pabrėžiant jų vaidmenį angiogenezėje ir audinių atstatyme.Tačiau neutrofilai taip pat gali sukelti žalingą poveikį, todėl kai kuriais atvejais jie netinka.Zhou ir Wang įrodė, kad naudojant PRP, kuriame gausu neutrofilų, gali padidėti III tipo kolageno ir I tipo kolageno santykis, taip paūmėja fibrozė ir sumažėja sausgyslių stiprumas.Kitos neutrofilų sukeliamos žalingos savybės yra uždegiminių citokinų ir matricos metaloproteinazių (MMP) išsiskyrimas, kurios gali paskatinti uždegimą ir katabolizmą, kai jos patenka į audinius.

 

Leukomonocitai

C-PRP mononukleariniai T ir B limfocitai yra labiau koncentruoti nei bet kurie kiti baltieji kraujo kūneliai.Jie yra glaudžiai susiję su ląstelių sukeltu citotoksiniu adaptyviu imunitetu.Limfocitai gali sukelti ląstelių reakcijas kovoti su infekcija ir prisitaikyti prie įsibrovėlių.Be to, iš T limfocitų gauti citokinai (interferonas-γ [IFN-γ] ir interleukinas-4 (IL-4) sustiprina makrofagų poliarizaciją. Verassar ir kt. Įrodyta, kad įprastiniai T limfocitai gali netiesiogiai skatinti audinių gijimą pelės modelis reguliuojant monocitų ir makrofagų diferenciaciją.

 

Monocitas – daugiapotentinė reparacinė ląstelė

Atsižvelgiant į naudojamą PRP paruošimo įrenginį, PRP gydymo buteliuke monocitai gali išsikišti arba jų nebūti.Deja, literatūroje retai kalbama apie jų veikimą ir regeneravimo galimybes.Todėl paruošimo būdu arba galutinėje formulėje monocitams skiriama mažai dėmesio.Monocitų grupė yra nevienalytė, kilusi iš progenitorinių ląstelių kaulų čiulpuose ir per kraujodaros kamieninių ląstelių kelią transportuojama į periferinius audinius pagal mikroaplinkos stimuliaciją.Homeostazės ir uždegimo metu cirkuliuojantys monocitai išeina iš kraujotakos ir patenka į sužalotus ar pažeistus audinius.Jie gali veikti kaip makrofagai (M Φ) Efektorinės ląstelės arba progenitorinės ląstelės.Monocitai, makrofagai ir dendritinės ląstelės atstovauja mononuklearinei fagocitinei sistemai (MPS). Tipiškas MPS bruožas yra jos genų ekspresijos modelio plastiškumas ir funkcinis šių ląstelių tipų sutapimas.Degeneruotuose audiniuose reziduojantys makrofagai, lokaliai veikiantys augimo faktoriai, priešuždegiminiai citokinai, apoptotinės ar nekrozinės ląstelės ir mikrobų produktai inicijuoja monocitus diferencijuotis į MPS ląstelių grupes.Tarkime, kai C-PRP turintys didelio derlingumo monocitai suleidžiami į vietinę ligos mikroaplinką, tikėtina, kad monocitai diferencijuos į M Φ, kad sukeltų didelius ląstelių pokyčius.

Nuo monocito iki M Φ Transformacijos procese specifinis M Φ Fenotipas.Per pastaruosius dešimt metų buvo sukurtas modelis, integruojantis M Φ Sudėtingas aktyvacijos mechanizmas apibūdinamas kaip dviejų priešingų būsenų poliarizacija: M Φ 1 fenotipas (M Φ 1, klasikinis aktyvavimas) ir M Φ 2 fenotipas (M Φ). 2, alternatyvus aktyvinimas).M Φ 1 būdinga uždegiminė citokinų sekrecija (IFN-γ) ir azoto oksidas, sukuriantis veiksmingą patogenų naikinimo mechanizmą.M Φ Fenotipas taip pat gamina kraujagyslių endotelio augimo faktorių (VEGF) ir fibroblastų augimo faktorių (FGF).M Φ Fenotipas susideda iš priešuždegiminių ląstelių, turinčių didelę fagocitozę.M Φ 2 Gamina ekstraląstelinės matricos komponentus, angiogenezę ir chemokinus bei interleukiną 10 (IL-10).Be apsaugos nuo patogenų, M Φ Jis taip pat gali sumažinti uždegimą ir skatinti audinių atstatymą.Pažymėtina, kad M Φ 2 buvo suskirstytas į M in vitro Φ 2a、M Φ 2b ir M Φ 2. Tai priklauso nuo dirgiklio.Šių potipių vertimas in vivo yra sunkus, nes audinyje gali būti mišrių M Φ grupių.Įdomu tai, kad remiantis vietiniais aplinkos signalais ir IL-4 lygiais, priešuždegiminis M Φ 1 gali būti konvertuojamas taip, kad būtų skatinamas atstatymas M Φ 2。 Remiantis šiais duomenimis galima pagrįstai manyti, kad yra didelė monocitų ir M Φ C-PRP preparatų koncentracija. gali prisidėti prie geresnio audinių atstatymo, nes turi priešuždegiminių audinių atstatymo ir ląstelių signalo perdavimo galimybes.

 

Supainiotas baltųjų kraujo kūnelių frakcijos apibrėžimas PRP

Baltųjų kraujo kūnelių buvimas PRP gydymo buteliukuose priklauso nuo PRP paruošimo prietaiso ir gali turėti reikšmingų skirtumų.Yra daug ginčų dėl leukocitų egzistavimo ir jų indėlio į skirtingus sub-PRP produktus (pvz., PRGF, P-PRP, LP-PRP, LR-PRP, P-PRF ir L-PRF). kontroliuojamuose tyrimuose (1 įrodymų lygis) ir trijuose prospektyviniuose lyginamuosiuose tyrimuose (2 įrodymų lygis) dalyvavo 1055 pacientai, o tai rodo, kad LR-PRP ir LP-PRP saugumas buvo panašus.Autorius padarė išvadą, kad nepageidaujama PRP reakcija gali būti tiesiogiai nesusijusi su baltųjų kraujo kūnelių koncentracija.Kitame tyrime LR-PRP nepakeitė uždegiminio interleukino (IL-1) OA kelio β, IL-6, IL-8 ir IL-17).Šie rezultatai patvirtina nuomonę, kad leukocitų vaidmuo PRP biologiniame aktyvumui in vivo gali atsirasti dėl trombocitų ir leukocitų skersinio pokalbio.Ši sąveika gali skatinti kitų veiksnių (pvz., lipdeguonies) biosintezę, kuri gali kompensuoti arba skatinti uždegimo regresiją.Po pradinio uždegiminių molekulių (arachidono rūgšties, leukotrieno ir prostaglandino) išsiskyrimo iš aktyvuotų trombocitų išsiskiria lipdeguonis A4, kad būtų išvengta neutrofilų aktyvacijos.Būtent šioje aplinkoje M Φ fenotipas iš M Φ 1 pereina į M Φ 2。 Be to, daugėja įrodymų, kad cirkuliuojančios mononuklearinės ląstelės dėl savo pluripotencijos gali diferencijuotis į įvairius nefagocitinius ląstelių tipus.

PRP tipas turės įtakos MSC kultūrai.Palyginti su grynais PRP arba PPP mėginiais, LR-PRP gali sukelti žymiai didesnį kaulų čiulpų kilmės MSC (BMMSC) proliferaciją, greičiau išsilaisvindamas ir geresniu PGF biologiniu aktyvumu.Visos šios savybės padeda pridėti monocitų į PRP gydymo buteliuką ir atpažinti jų imunomoduliacinį gebėjimą ir diferenciacijos potencialą.

 

Įgimtas ir adaptyvus imuninis PRP reguliavimas

Garsiausia fiziologinė trombocitų funkcija – kontroliuoti kraujavimą.Jie kaupiasi audinių pažeidimo vietoje ir pažeistose kraujagyslėse.Šiuos reiškinius sukelia integrinų ir selektinų, skatinančių trombocitų adheziją ir agregaciją, ekspresija.Pažeistas endotelis dar labiau apsunkina šį procesą, o veikiamas kolagenas ir kiti subendotelinės matricos baltymai skatina gilų trombocitų aktyvavimą.Šiais atvejais buvo įrodytas svarbus sąveikos tarp von Willebrand faktoriaus (vWF) ir glikoproteino (GP), ypač GP-Ib, vaidmuo.Po trombocitų aktyvacijos trombocitai α-、 Tankios, lizosomos ir T-granulės reguliuoja egzocitozę ir išskiria savo turinį į tarpląstelinę aplinką.

 

Trombocitų adhezijos molekulė

Norėdami geriau suprasti PRP vaidmenį uždegiminiuose audiniuose ir trombocituose imuniniame atsake, turėtume suprasti, kaip skirtingi trombocitų paviršiaus receptoriai (integrinai) ir jungties adhezijos molekulės (JAM) ir ląstelių sąveika gali inicijuoti svarbius įgimto ir adaptacinio imuniteto procesus.

Integrinai yra ląstelių paviršiaus adhezijos molekulės, randamos įvairių tipų ląstelėse ir išreiškiamos dideliais kiekiais trombocituose.Integrinai apima a5b1, a6b1, a2b1 LFA-2, (GPIa/IIa) ir aIIbb3 (GPIIb/IIIa).Paprastai jie egzistuoja statinėje ir mažo giminingumo būsenoje.Po aktyvavimo jie pereina į didelio ligandų surišimo afiniteto būseną.Integrinai atlieka skirtingas trombocitų funkcijas ir dalyvauja trombocitų sąveikoje su kelių tipų baltaisiais kraujo kūneliais, endotelio ląstelėmis ir tarpląsteline matrica.Be to, GP-Ib-V-IX kompleksas yra ekspresuojamas trombocitų membranoje ir yra pagrindinis receptorius, jungiantis su von vWF.Ši sąveika tarpininkauja pradiniam trombocitų ir atvirų subendotelinių struktūrų kontaktui.Trombocitų integrinas ir GP kompleksas yra susiję su įvairiais uždegiminiais procesais ir vaidina svarbų vaidmenį formuojant trombocitų-leukocitų kompleksą.Konkrečiai, integrinas aIIbb3 yra būtinas norint sudaryti stabilų kompleksą, sujungiant fibrinogeną su makrofago 1 antigeno (Mac-1) receptoriumi neutrofiluose.

Trombocitai, neutrofilai ir kraujagyslių endotelio ląstelės išreiškia specifines ląstelių adhezijos molekules, vadinamas selektinu.Uždegiminėmis sąlygomis trombocitai ekspresuoja P-selektiną ir neutrofilų L-selektiną.Po trombocitų aktyvacijos P-selektinas gali prisijungti prie ligando PSGL-1, esančio ant neutrofilų ir monocitų.Be to, PSGL-1 surišimas inicijuoja tarpląstelinę signalo kaskados reakciją, kuri suaktyvina neutrofilus per neutrofilų integriną Mac-1 ir su limfocitų funkcija susijusį antigeną 1 (LFA-1).Suaktyvintas Mac-1 per fibrinogeną jungiasi prie trombocitų GPIb arba GPIIb/IIIa, taip stabilizuodamas neutrofilų ir trombocitų sąveiką.Be to, aktyvuota LFA-1 gali būti sujungta su trombocitų tarpląstelinės adhezijos molekule 2, kad toliau stabilizuotų neutrofilų ir trombocitų kompleksą, kad būtų skatinamas ilgalaikis sukibimas su ląstelėmis.

 

Trombocitai ir leukocitai atlieka pagrindinį vaidmenį įgimtame ir adaptyviame imuniniame atsake

Kūnas gali atpažinti svetimkūnius ir pažeistus audinius sergant ūminėmis ar lėtinėmis ligomis, kad būtų pradėta žaizdų gijimo kaskadinė reakcija ir uždegimo kelias.Įgimta ir prisitaikanti imuninė sistema apsaugo šeimininką nuo infekcijos, o baltieji kraujo kūneliai atlieka svarbų vaidmenį sutapdami tarp dviejų sistemų.Konkrečiai, monocitai, makrofagai, neutrofilai ir natūralios ląstelės žudikai atlieka pagrindinį vaidmenį įgimtoje sistemoje, o limfocitai ir jų pogrupiai vaidina panašų vaidmenį adaptyvioje imuninėje sistemoje.

Trombocitai ir leukocitai

 

Trombocitų ir leukocitų sąveika įgimtoje imuninių ląstelių sąveikoje.Trombocitai sąveikauja su neutrofilais ir monocitais, galiausiai su M Φ Sąveikauja, koreguoja ir padidina jų efektorines funkcijas.Šios trombocitų ir leukocitų sąveikos sukelia uždegimą įvairiais mechanizmais, įskaitant NETozę.Santrumpos: MPO: mieloperoksidazė, ROS: reaktyviosios deguonies rūšys, TF: audinių faktorius, NET: neutrofilų ekstraląstelinis spąstai, NF-κ B: Branduolinis faktorius kappa B, M Φ: Makrofagai.

 

Įgimta imuninė sistema

Įgimtos imuninės sistemos vaidmuo yra nespecifinis invazinių mikroorganizmų ar audinių fragmentų identifikavimas ir jų pašalinimo stimuliavimas.Kai tam tikros molekulinės struktūros, vadinamos paviršiaus ekspresijos modelio atpažinimo receptoriais (PRR), susijungia su su patogenais susijusiais molekuliniais modeliais ir su pažeidimais susijusiais molekuliniais modeliais, įgimta imuninė sistema bus aktyvuota.Yra daugybė PRR rūšių, įskaitant į Toll panašius receptorius (TLR) ir RIG-1 panašius receptorius (RLR).Šie receptoriai gali aktyvuoti pagrindinį transkripcijos faktorių kappa B (NF-κ B). Jis taip pat reguliuoja įvairius įgimto ir adaptyvaus imuninio atsako aspektus.Įdomu tai, kad trombocitai savo paviršiuje ir citoplazmoje taip pat išreiškia įvairias imunoreguliacinių receptorių molekules, tokias kaip P-selektinas, transmembraninio baltymo CD40 ligandas (CD40L), citokinai (pvz., IL-1 β、 TGF- β)) ir trombocitams specifinis TLR. Todėl trombocitai gali sąveikauti su įvairiomis imuninėmis ląstelėmis.

 

Trombocitų ir baltųjų ląstelių sąveika įgimtame imunitete

Kai trombocitai patenka į kraujotaką ar audinį arba įsiskverbia į juos, trombocitai yra viena iš ląstelių, kurios pirmiausia nustato endotelio pažeidimą ir mikrobų patogenus.Trombocitų agregacija ir skatinamas trombocitų agonistų ADP, trombino ir vWF išsiskyrimas, dėl kurio suaktyvėja trombocitai ir ekspresuojami trombocitų chemokino receptoriai C, CC, CXC ir CX3C, taip sukeldami trombocitus užkrėstoje vietoje arba sužalodami.

Įgimta imuninė sistema yra genetiškai iš anksto nustatyta aptikti įsibrovėlių, tokių kaip virusai, bakterijos, parazitai ir toksinai, arba audinių žaizdos ir žaizdos.Tai nespecifinė sistema, nes bet koks patogenas bus identifikuojamas kaip svetimas ar nesavas ir greitai randamas.Įgimta imuninė sistema remiasi baltymų ir fagocitų rinkiniu, kurie atpažįsta gerai išsilaikiusias patogenų savybes ir greitai suaktyvina imuninį atsaką, kad padėtų pašalinti įsibrovėjus, net jei šeimininkas niekada anksčiau nebuvo veikiamas specifinių patogenų.

Neutrofilai, monocitai ir dendritinės ląstelės yra labiausiai paplitusios įgimtos imuninės ląstelės kraujyje.Jų įdarbinimas yra būtinas tinkamam ankstyvam imuniniam atsakui.Kai PRP naudojamas regeneracinėje medicinoje, trombocitų ir baltųjų ląstelių sąveika reguliuoja uždegimą, žaizdų gijimą ir audinių atstatymą.TLR-4 ant trombocitų stimuliuoja trombocitų ir neutrofilų sąveiką, kuri reguliuoja vadinamąjį leukocitų oksidacinį sprogimą, reguliuodamas reaktyviųjų deguonies rūšių (ROS) ir mieloperoksidazės (MPO) išsiskyrimą iš neutrofilų.Be to, sąveika tarp trombocitų-neutrofilų ir neutrofilų degranuliacijos sukelia neutrofilų-ekstraląstelinių spąstų (NET) susidarymą.NET susideda iš neutrofilų branduolio ir kito neutrofilų tarpląstelinio turinio, kuris gali sugauti bakterijas ir jas nužudyti per NETozę.NET formavimas yra esminis neutrofilų naikinimo mechanizmas.

Po trombocitų aktyvacijos monocitai gali migruoti į sergančius ir degeneracinius audinius, kur jie atlieka adhezijos veiklą ir išskiria uždegimines molekules, kurios gali pakeisti chemotaksį ir proteolitines savybes.Be to, trombocitai gali sukelti monocitų NF-κ B aktyvaciją, kad reguliuotų monocitų efektorinę funkciją, kuri yra pagrindinis uždegiminio atsako ir imuninių ląstelių aktyvacijos bei diferenciacijos tarpininkas.Trombocitai toliau skatina endogeninį oksidacinį monocitų sprogimą, kad paskatintų fagocitinių patogenų sunaikinimą.MPO išsiskyrimą skatina tiesioginė trombocitų ir monocitų CD40L-MAC-1 sąveika.Įdomu tai, kad kai P-selektinas aktyvuoja trombocitus esant ūminėms ir lėtinėms uždegiminėms audinių sąlygoms, iš trombocitų gauti chemokinai PF4, RANTES, IL-1 β ir CXCL-12 gali užkirsti kelią spontaniškai monocitų apoptozei, tačiau skatina jų diferenciaciją į makrofagus.

 

Adaptyvi imuninė sistema

Nespecifinei įgimtai imuninei sistemai atpažinus mikrobų ar audinių pažeidimus, perims specifinė adaptyvi imuninė sistema.Adaptyviosios sistemos apima antigenus surišančius B limfocitus (B ląsteles) ir įprastinius T limfocitus (Treg), kurie koordinuoja patogenų pašalinimą.T ląstelės gali būti apytiksliai suskirstytos į pagalbines T ląsteles (Th ląsteles) ir citotoksines T ląsteles (Tc ląsteles, taip pat žinomas kaip T ląsteles žudikas).Th ląstelės toliau skirstomos į Th1, Th2 ir Th17 ląsteles, kurios atlieka pagrindines uždegimo funkcijas.Th ląstelės gali išskirti priešuždegiminius citokinus (pvz., IFN-γ、 TNF-β) ir keletą interleukinų (pvz., IL-17). Jie ypač veiksmingi užkertant kelią tarpląstelinei virusinei ir bakterinei infekcijai. Th ląstelės skatina ląstelių, dalyvaujančių Tc ląstelės yra efektorinės ląstelės, kurios gali pašalinti tikslinius tarpląstelinius ir tarpląstelinius mikroorganizmus ir ląsteles.

Įdomu tai, kad Th2 ląstelės gamina IL-4 ir veikia M Φ poliarizaciją, M Φ vadovaujamą regeneraciją M Φ 2 fenotipą, o IFN- γ M Φ keičia uždegiminį M Φ 1 fenotipą, kuris priklauso nuo citokinų dozės ir laiko.Suaktyvinus IL-4, M Φ 2 skatina Treg ląsteles diferencijuotis į Th2 ląsteles ir tada gamina papildomą IL-4 (teigiamas grįžtamasis ryšys).Th ląstelės konvertuoja M Φ Fenotipas nukreipiamas į regeneracinį fenotipą, reaguojant į audinių kilmės biologinius veiksnius.Šis mechanizmas pagrįstas įrodymais, kad Th ląstelės vaidina svarbų vaidmenį kontroliuojant uždegimą ir audinių atstatymą.

 

Trombocitų ir baltųjų ląstelių sąveika adaptyviajame imunitete

Adaptyvi imuninė sistema naudoja specifinius antigenui receptorius ir prisimena anksčiau sutiktus patogenus, o vėliau susidūrusi su šeimininku juos sunaikina.Tačiau šie prisitaikantys imuniniai atsakai vystėsi lėtai.Konias ir kt.Tai rodo, kad trombocitų komponentas prisideda prie rizikos suvokimo ir audinių atstatymo, o trombocitų ir leukocitų sąveika skatina adaptyvaus imuninio atsako aktyvavimą.

Adaptyviojo imuninio atsako metu trombocitai skatina monocitų ir makrofagų atsaką per DC ir NK ląstelių brendimą, todėl atsiranda specifinis T ląstelių ir B ląstelių atsakas.Todėl trombocitų granulių komponentai tiesiogiai veikia adaptyvųjį imunitetą, išreikšdami CD40L – molekulę, kuri yra būtina adaptyviam imuniniam atsakui reguliuoti.Trombocitai per CD40L ne tik vaidina antigeno pateikimo vaidmenį, bet ir veikia T ląstelių reakciją.Liu ir kt.Nustatyta, kad trombocitai kompleksiškai reguliuoja CD4 T ląstelių atsaką.Šis skirtingas CD4 T ląstelių pogrupių reguliavimas reiškia, kad trombocitai skatina CD4 T ląsteles reaguoti į uždegiminius dirgiklius, taip sukeldami stiprų priešuždegiminį ir priešuždegiminį atsaką.

Trombocitai taip pat reguliuoja B ląstelių sukeltą adaptyvų atsaką į mikrobų patogenus.Gerai žinoma, kad CD40L ant aktyvuotų CD4 T ląstelių suaktyvins B ląstelių CD40, suteikdamas antrą signalą, reikalingą nuo T ląstelių priklausomam B limfocitų aktyvavimui, vėlesniam alotipo konversijai ir B ląstelių diferenciacijai bei proliferacijai.Apskritai, rezultatai aiškiai parodo įvairias trombocitų funkcijas adaptaciniame imunitete, o tai rodo, kad trombocitai sujungia T ląstelių ir B ląstelių sąveiką per CD40-CD40L, taip sustiprindami nuo T ląstelių priklausomą B ląstelių atsaką.Be to, trombocituose gausu ląstelės paviršiaus receptorių, kurie gali skatinti trombocitų aktyvaciją ir išlaisvinti daugybę uždegiminių ir biologiškai aktyvių molekulių, sukauptų skirtingose ​​trombocitų dalelėse, taip paveikdamos įgimtą ir adaptyvų imuninį atsaką.

 

Išplėstas trombocitų kilmės serotonino vaidmuo PRP

Serotoninas (5-hidroksitriptaminas, 5-HT) turi aiškų pagrindinį vaidmenį centrinėje nervų sistemoje (CNS), įskaitant skausmo toleravimą.Apskaičiuota, kad didžioji dalis žmogaus 5-HT susidaro virškinimo trakte, o vėliau per kraujotaką, kur jį absorbuoja trombocitai per serotonino reabsorbcijos transporterį ir kaupiasi tankiose dalelėse didelėje koncentracijoje (65 mmol/L).5-HT yra gerai žinomas neurotransmiteris ir hormonas, padedantis reguliuoti įvairius neuropsichologinius procesus CNS (centrinis 5-HT).Tačiau didžioji dalis 5-HT egzistuoja už CNS ribų (periferinė 5-HT) ir dalyvauja reguliuojant daugelio organų sistemų, įskaitant širdies ir kraujagyslių, plaučių, virškinimo trakto, urogenitalinę ir trombocitų funkcines sistemas, sistemines ir ląstelių biologines funkcijas.5-HT metabolizmas priklauso nuo koncentracijos įvairių tipų ląstelėse, įskaitant adipocitus, epitelio ląsteles ir baltuosius kraujo kūnelius.Periferinis 5-HT taip pat yra galingas imuninis moduliatorius, kuris gali stimuliuoti arba slopinti uždegimą ir paveikti įvairias imunines ląsteles per specifinį 5-HT receptorių (5HTR).

 

Parakrininis ir autokrininis HT mechanizmas

5-HT aktyvumą lemia jo sąveika su 5HTR, kurie yra superšeima, turinti septynis narius (5-HT 1 – 7) ir mažiausiai 14 skirtingų receptorių potipių, įskaitant neseniai atrastą narį 5-HT 7, jo periferinius ir funkcija valdant skausmą.Trombocitų degranuliacijos procese aktyvuoti trombocitai išskiria daug trombocitų kilmės 5-HT, kuris gali paskatinti kraujagyslių susitraukimą ir stimuliuoti gretimų trombocitų bei limfocitų aktyvaciją dėl 5-HTR ekspresijos endotelio ląstelėse, lygiųjų raumenų ląstelėse ir imuninės ląstelės.Pacala ir kt.Ištirtas 5-HT mitozinis poveikis kraujagyslių endotelio ląstelėms, nustatytas potencialas skatinti pažeistų kraujagyslių augimą stimuliuojant angiogenezę.Kaip šie procesai reguliuojami, nėra visiškai aišku, bet tai gali apimti skirtingus dvipusio signalo kelius audinių mikrograndėje, kad būtų reguliuojamos kraujagyslių endotelio ląstelių ir lygiųjų raumenų ląstelių, fibroblastų ir imuninių ląstelių funkcijos per specifinius šių ląstelių 5-HT receptorius. .Trombocitų 5-HT autokrininė funkcija po trombocitų aktyvacijos buvo aprašyta [REF].5-HT išsiskyrimas sustiprina trombocitų aktyvavimą ir cirkuliuojančių trombocitų pritraukimą, todėl suaktyvėja signalų kaskados reakcijos ir prieš srovę esantys efektoriai, palaikantys trombocitų reaktyvumą.

 

Imunomoduliuojantis 5-HT poveikis

Vis daugiau įrodymų rodo, kad serotoninas gali vaidinti skirtingą 5HTR vaidmenį kaip imuninės sistemos moduliatorius.Pagal 5HTR, išreikštą įvairiuose leukocituose, dalyvaujančiuose uždegiminėje reakcijoje, trombocitų kilmės 5-HT veikia kaip imuninės sistemos reguliatorius tiek įgimtoje, tiek adaptyvioje imuninėje sistemoje.5-HT gali stimuliuoti Treg proliferaciją ir reguliuoti B ląstelių, natūralių žudikų ląstelių ir neutrofilų funkcijas, įdarbindamas DC ir monocitus į uždegiminę vietą.Naujausi tyrimai parodė, kad trombocitų kilmės 5-HT gali reguliuoti imuninių ląstelių funkciją tam tikromis sąlygomis.Todėl, naudojant C-PRP, trombocitų koncentracija yra didesnė nei 1 × 10 6/µL, gali žymiai padėti transportuoti 5-HT koncentraciją, gautą iš didelių trombocitų, į audinį.Mikroaplinkoje, kuriai būdingi uždegiminiai komponentai, PRP gali sąveikauti su keliomis imuninėmis ląstelėmis, kurios vaidina pagrindinį vaidmenį šiose patologijose, o tai gali turėti įtakos klinikiniams rezultatams.

Imunomoduliacinis-5-HT-efektas

Paveikslas, kuriame parodytas daugialypis 5-HT atsakas po uždegiminių PRP trombocitų aktyvavimo.Po trombocitų aktyvavimo trombocitai išskiria savo granules, įskaitant 5-HT tankiose granulėse, kurios turi platų skirtingą poveikį įvairioms imuninėms ląstelėms, endotelio ląstelėms ir lygiųjų raumenų ląstelėms.Santrumpos: SMC: lygiųjų raumenų ląstelės, EC: endotelio ląstelės, Treg: įprasti T limfocitai, M Φ: makrofagai, DC: dendritinės ląstelės, IL: interleukinas, IFN-γ: interferonas γ. Modifikuota ir pritaikyta iš Everts ir kt.ir Hull ir kt.

 

PRP analgezinis poveikis

Suaktyvėję trombocitai išskirs daug priešuždegiminių ir priešuždegiminių mediatorių, kurie gali ne tik sukelti skausmą, bet ir sumažinti uždegimą bei skausmą.Pritaikius, tipinė PRP trombocitų dinamika keičia mikroaplinką prieš audinių atstatymą ir regeneraciją įvairiais sudėtingais būdais, susijusiais su anabolizmu ir katabolizmu, ląstelių proliferacija, diferenciacija ir kamieninių ląstelių reguliavimu.Dėl šių PRP savybių PRP taikomas esant įvairioms klinikinėms patologinėms būklėms, paprastai susijusioms su lėtiniu skausmu (pvz., sporto traumos, ortopedinės ligos, stuburo ligos ir sudėtingos lėtinės žaizdos), nors tikslus mechanizmas iki galo nenustatytas.

2008 m. Evertz ir kt.Tai pirmasis atsitiktinių imčių kontroliuojamas tyrimas, kuriame pranešama apie PRP preparato, paruošto iš rudojo autologinio eritrocitų nusėdimo greičio sluoksnio ir aktyvuoto autologiniu trombinu po peties operacijos, analgezinį poveikį.Jie pastebėjo reikšmingą vizualinės analoginės skalės balų sumažėjimą, opioidinių analgetikų vartojimą ir sėkmingesnę pooperacinę reabilitaciją.Pažymėtina, kad jie atspindi aktyvuotų trombocitų analgetinį poveikį ir spėlioja trombocitų, išskiriančių 5-HT, mechanizmą.Trumpai tariant, trombocitai neveikia šviežiai paruoštame PRP.Tiesiogiai arba netiesiogiai suaktyvinus trombocitus (audinio faktorius), trombocitai keičia formą ir susidaro pakankamai klaidingi, kad skatintų trombocitų agregaciją.Tada jie išskiria tarpląstelines α- ir tankias daleles.Į audinį, apdorotą aktyvintu PRP, pateks PGF, citokinai ir kitos trombocitų lizosomos.Tiksliau, kai tankios dalelės išskiria savo turinį, jos išskirs didelį kiekį 5-HT, kuris reguliuoja skausmą.C-PRP trombocitų koncentracija yra 5–7 kartus didesnė nei periferiniame kraujyje.Todėl 5-HT išsiskyrimas iš trombocitų yra astronominis.Įdomu tai, kad Sprott ir kt.Ataskaitoje pastebėta, kad skausmas žymiai sumažėjo po akupunktūros ir moksibuscijos, trombocitų kilmės 5-HT koncentracija buvo žymiai sumažinta, o tada padidėjo 5-HT lygis plazmoje.

Periferijoje trombocitai, putliosios ląstelės ir endotelio ląstelės išskirs endogeninį 5-HT audinių pažeidimo ar chirurginės traumos metu.Įdomu tai, kad periferinėje srityje buvo aptikti įvairūs neuronų 5-HT receptoriai, kurie patvirtino, kad 5-HT gali trukdyti nociceptiniam perdavimui periferinėje srityje.Šie tyrimai rodo, kad 5-HT gali paveikti nociceptinį periferinių audinių perdavimą per 5-HT1, 5-HT2, 5-HT3, 5-HT4 ir 5-HT7 receptorius.

5-HT sistema yra galinga sistema, kuri gali sumažinti ir padidinti skausmo laipsnį po žalingos stimuliacijos.Buvo pranešta apie centrinį ir periferinį nociceptinių signalų reguliavimą ir 5-HT sistemos pokyčius pacientams, sergantiems lėtiniu skausmu.Pastaraisiais metais daugybė tyrimų buvo sutelkti į 5-HT ir atitinkamų jo receptorių vaidmenį apdorojant ir reguliuojant žalingą informaciją, todėl buvo sukurti vaistai, tokie kaip selektyvūs serotonino reabsorbcijos inhibitoriai (SSRI).Šis vaistas slopina serotonino reabsorbciją į presinapsinius neuronus po serotonino išsiskyrimo.Jis turi įtakos serotonino komunikacijos trukmei ir intensyvumui ir yra alternatyvus lėtinio skausmo gydymas.Reikia atlikti tolesnius klinikinius tyrimus, kad būtų galima aiškiai suprasti PRP gauto 5-HT skausmo reguliavimo molekulinį mechanizmą sergant lėtinėmis ir degeneracinėmis ligomis.

Kitų duomenų, leidžiančių išspręsti galimą PRP analgezinį poveikį, galima gauti atlikus analgetinį gyvūnų modelio bandymą.Šių modelių lyginamosios statistinės išvados yra sudėtingos, nes šiuose tyrimuose yra per daug kintamųjų.Nepaisant to, kai kuriuose klinikiniuose tyrimuose buvo nagrinėjamas nociceptinis ir analgetinis PRP poveikis.Keletas tyrimų parodė, kad pacientai, gydomi nuo tendinozės ar sukamųjų manžetų plyšimų, mažai malšina skausmą.Priešingai, keli kiti tyrimai parodė, kad PRP gali sumažinti ar net pašalinti skausmą pacientams, sergantiems sausgyslių degeneracija, OA, padų fascitu ir kitomis pėdos bei kulkšnies ligomis.Galutinė trombocitų koncentracija ir biologinė ląstelių sudėtis buvo nustatytos kaip pagrindinės PRP charakteristikos, kurios padeda stebėti nuoseklų analgezinį poveikį po PRP panaudojimo.Kiti kintamieji apima PRP įvedimo būdą, taikymo technologiją, trombocitų aktyvinimo protokolą, PGF ir išskiriamų citokinų biologinio aktyvumo lygį, PRP panaudojimo audinių tipą ir sužalojimo tipą.

Pastebėtina, kad Kuffler išsprendė PRP potencialą malšinant skausmą pacientams, sergantiems nuo lengvo iki sunkaus lėtinio neuropatinio skausmo, antrinio dėl pažeisto neregeneracinio nervo.Šio tyrimo tikslas – ištirti, ar neuropatinis skausmas gali sumažėti ar nuslopti dėl PRP, skatinančio aksonų regeneraciją ir tikslinio nervo reinervaciją.Keista, kad tarp besigydančių pacientų neuropatinis skausmas vis dar išnyksta arba palengvėja praėjus mažiausiai šešeriems metams po operacijos.Be to, visi pacientai pradėjo malšinti skausmą per tris savaites po PRP taikymo.

Pastaruoju metu panašus analgezinis PRP poveikis pastebėtas pooperacinės žaizdų ir odos priežiūros srityje.Įdomu tai, kad autoriai pranešė apie fiziologinius žaizdų skausmo aspektus, susijusius su kraujagyslių pažeidimu ir odos audinių hipoksija.Jie taip pat aptarė angiogenezės svarbą optimizuojant deguonies tiekimą ir maistinių medžiagų tiekimą.Jų tyrimas parodė, kad, palyginti su kontroline grupe, PRP gydomiems pacientams buvo mažiau skausmo ir žymiai padidėjo angiogenezė.Galiausiai Johalas ir jo kolegos atliko sistemingą apžvalgą ir metaanalizę ir padarė išvadą, kad PRP gali sumažinti skausmą po PRP panaudojimo pagal ortopedines indikacijas, ypač pacientams, gydomiems išoriniu epikondilitu ir kelio OA.Deja, šiame tyrime nenurodytas baltųjų kraujo kūnelių, trombocitų koncentracijos ar egzogeninių trombocitų aktyvatorių naudojimo poveikis, nes šie kintamieji turėtų įtakos bendram PRP efektyvumui.Optimali PRP trombocitų koncentracija maksimaliam skausmo malšinimui yra neaiški.Žiurkių tendinozės modelyje trombocitų koncentracija buvo 1,0 × 10 6 / μ L, skausmas gali būti visiškai sumažintas, o PRP sukeltas skausmo malšinimas per pusę trombocitų koncentracijos žymiai sumažėja.Todėl skatiname atlikti daugiau klinikinių tyrimų, siekiant ištirti skirtingų PRP preparatų analgezinį poveikį.

 

PRP ir angiogenezės poveikis

C-PRP preparatai tikslioje regeneracinėje medicinoje leidžia pristatyti biomolekules, kurias išskiria didelė trombocitų koncentracija, aktyvuota tikslinėse audinių vietose.Todėl buvo inicijuotos įvairios kaskadinės reakcijos, kurios prisideda prie imuninės sistemos reguliavimo vietoje, uždegiminio proceso ir angiogenezės, skatinančios gijimą ir audinių atstatymą.

Angiogenezė yra dinamiškas kelių etapų procesas, apimantis daigumą ir audinių mikrokraujagysles iš jau esančių kraujagyslių.Angiogenezė progresavo dėl įvairių biologinių mechanizmų, įskaitant endotelio ląstelių migraciją, proliferaciją, diferenciaciją ir dalijimąsi.Šie ląstelių procesai yra būtina sąlyga naujų kraujagyslių susidarymui.Jie yra būtini jau esamų kraujagyslių augimui, siekiant atkurti kraujotaką ir palaikyti aukštą medžiagų apykaitos aktyvumą audinių atstatymo ir regeneracijos metu.Šios naujos kraujagyslės leidžia tiekti deguonį ir maistines medžiagas bei pašalinti šalutinius produktus iš apdorotų audinių.

Angiogenezės aktyvumą reguliuoja stimuliuojantis angiogeninis faktorius VEGF ir antiangiogeniniai faktoriai (pvz., angiostatinas ir trombospondinas-1 [TSP-1]).Sergantoje ir degradavusioje mikroaplinkoje (įskaitant mažą deguonies įtampą, žemą pH ir aukštą pieno rūgšties kiekį) vietiniai angiogeniniai veiksniai atkurs angiogenezės aktyvumą.

Kelios trombocituose tirpios terpės, tokios kaip bazinis FGF ir TGF-β ir VEGF, gali paskatinti endotelio ląsteles gaminti naujas kraujagysles.Landsdown ir Fortier pranešė apie įvairius rezultatus, susijusius su PRP sudėtimi, įskaitant daugelio angiogeninių reguliatorių intratrombocitų šaltinius.Be to, jie padarė išvadą, kad angiogenezės padidėjimas prisideda prie MSK ligos gijimo tose srityse, kuriose yra bloga vaskuliarizacija, pvz., Menisko plyšimas, sausgyslių pažeidimas ir kitose vietose, kuriose yra bloga vaskuliarizacija.

 

Skatinančios ir antiangiogenines trombocitų savybes

Per pastaruosius kelis dešimtmečius paskelbti tyrimai įrodė, kad trombocitai atlieka pagrindinį vaidmenį pirminėje hemostazėje, krešulių susidaryme, augimo faktoriaus ir citokinų išsiskyrime bei angiogenezės reguliavime kaip audinių atstatymo proceso dalis.Paradoksalu, bet PRP α- granulėse yra proangiogeninių augimo faktorių, antiangiogeninių baltymų ir citokinų (tokių kaip PF4, plazminogeno aktyvatoriaus inhibitorius-1 ir TSP-1) arsenalas. .Vaidmuo angiogenezėje.Todėl PRP vaidmuo kontroliuojant angiogenezės reguliavimą gali būti apibrėžtas specifinių ląstelės paviršiaus receptorių aktyvavimu, TGF-β inicijuoja proangiogenines ir antiangiogenines reakcijas.Trombocitų gebėjimas atlikti angiogenezės kelią buvo patvirtintas patologinės angiogenezės ir naviko angiogenezės metu.

Trombocitų kilmės angiogeninis augimo faktorius ir antiangiogeninis augimo faktorius, gaunamas iš α- ir tankių bei lipnių molekulių.Svarbiausia, kad visuotinai pripažįstama, kad bendras trombocitų poveikis angiogenezei yra pro-angiogeninis ir stimuliuojantis.Tikimasi, kad PRP terapija kontroliuos angiogenezės indukciją, kuri prisidės prie daugelio ligų, tokių kaip žaizdų gijimas ir audinių taisymas, gydymo efekto.PRP skyrimas, tiksliau didelės koncentracijos PGF ir kitų trombocitų citokinų skyrimas, gali sukelti angiogenezę, angiogenezę ir arteriogenezę, nes stromos ląstelių kilmės faktorius 1a prisijungia prie CXCR4 receptorių endotelio progenitorinėse ląstelėse.Billas ir kt.Manoma, kad PRP padidina išeminę neovaskuliarizaciją, kuri gali atsirasti dėl angiogenezės, angiogenezės ir arteriogenezės stimuliavimo.Jų in vitro modelyje endotelio ląstelių proliferaciją ir kapiliarų susidarymą sukėlė daugybė skirtingų PDG, iš kurių VEGF buvo pagrindinis angiogeninis stimuliatorius.Kitas svarbus ir esminis angiogenezės kelio atkūrimo veiksnys yra kelių PGF sinergija.Richardsonas ir kt.Įrodyta, kad angiogeninio faktoriaus trombocitų kilmės augimo faktoriaus-bb (PDGF-BB) ir VEGF sinergetinis aktyvumas sąlygojo greitą brandaus kraujagyslių tinklo formavimąsi, palyginti su individualaus augimo faktoriaus aktyvumu.Šių veiksnių bendras poveikis neseniai buvo patvirtintas atlikus tyrimą dėl smegenų kolateralinės kraujotakos pagerinimo pelėms, kurioms buvo ilgalaikė hipoperfuzija.

Svarbiausia, kad in vitro tyrime buvo išmatuotas žmogaus bambos venų endotelio ląstelių ir įvairių trombocitų koncentracijų proliferacinis poveikis renkantis PRP paruošimo prietaisą ir trombocitų dozės strategiją, o rezultatai parodė, kad optimali trombocitų dozė buvo 1,5 × 10 6 trombocitų/μ 50. Skatinti angiogenezę.Per didelė trombocitų koncentracija gali slopinti angiogenezės procesą, todėl poveikis yra silpnas.

 

Ląstelių senėjimas, senėjimas ir PRP

Ląstelių senėjimą gali sukelti įvairūs dirgikliai.Tai procesas, kurio metu ląstelės nustoja dalytis ir patiria unikalius fenotipinius pokyčius, kad būtų užkirstas kelias neribotam pažeistų ląstelių augimui, o tai atlieka svarbų vaidmenį vėžio prevencijoje.Fiziologinio senėjimo procese ląstelių replikacijos senėjimas taip pat skatins ląstelių senėjimą, sumažės MSC regeneracijos galimybės.

 

Senėjimo ir ląstelių senėjimo poveikis

In vivo daugelis ląstelių tipų sensta ir kaupiasi įvairiuose audiniuose, tarp kurių yra daug senstančių ląstelių.Panašu, kad senstančių ląstelių kaupimasis didėja didėjant amžiui, pažeidžiant imuninę sistemą, pažeidus audinius ar su stresu susijusius veiksnius.Ląstelių senėjimo mechanizmas buvo nustatytas kaip su amžiumi susijusių ligų, tokių kaip osteoartritas, osteoporozė ir tarpslankstelinių diskų degeneracija, patogeninis veiksnys.Įvairūs dirgikliai apsunkins ląstelių senėjimą.Reaguodama į tai, su senėjimu susijęs sekrecijos fenotipas (SASP) išskirs didelę baltymų ląstelių ir citokinų koncentraciją.Šis ypatingas fenotipas yra susijęs su senstančiomis ląstelėmis, kuriose jos išskiria daug uždegiminių citokinų (tokių kaip IL-1, IL-6, IL-8), augimo faktorių (tokių kaip TGF-β、 HGF, VEGF, PDGF), MMP ir katepsinas.Palyginti su jaunais žmonėmis, buvo įrodyta, kad SAPS didėja su amžiumi, nes sunaikinamas pastovios būsenos procesas, dėl kurio ląstelės sensta ir sumažėja regeneracijos galimybės.Tiksliau, sergant sąnarių ir skeleto raumenų ligomis.Šiuo atžvilgiu imuninis senėjimas laikomas reikšmingu imuninių ląstelių sekrecijos spektro pokyčiu, o tai rodo, kad didėja TNF-a, IL-6 ir (arba) Il-1b koncentracija, o tai lemia žemo laipsnio lėtinį uždegimą.Verta paminėti, kad kamieninių ląstelių disfunkcija taip pat yra susijusi su neląsteliniais autonominiais mechanizmais, tokiais kaip ląstelių senėjimas, ypač priešuždegiminių ir antiregeneracinių veiksnių gamyba naudojant SASP.

Priešingai, SASP taip pat gali paskatinti ląstelių plastiškumą ir gretimų ląstelių perprogramavimą.Be to, SASP gali organizuoti ryšį su įvairiais imuniniais tarpininkais ir suaktyvinti imunines ląsteles, kad paskatintų senstančių ląstelių klirensą.Senstančių ląstelių vaidmens ir funkcijų supratimas prisidės prie MSK raumenų ir lėtinių žaizdų gijimo ir audinių remodeliavimo.

Pažymėtina, kad Ritcka ir kt.Buvo atliktas platus tyrimas, nustatytas pagrindinis ir naudingas SASP vaidmuo skatinant ląstelių plastiškumą ir audinių regeneraciją bei pristatyta senstančių ląstelių laikino gydymo koncepcija.Jie atsargiai paminėjo, kad senėjimas daugiausia yra naudingas ir regeneruojantis procesas.

 

Ląstelių senėjimas ir PRP potencialas

Mažėjant kamieninių ląstelių skaičiui, senėjimas turės įtakos kamieninių ląstelių veikimui.Panašiai žmonių kamieninių ląstelių savybės (pvz., sausumas, dauginimasis ir diferenciacija) taip pat mažėja su amžiumi.Wang ir Nirmala pranešė, kad senėjimas sumažins sausgyslių ląstelių kamieninių ląstelių savybes ir augimo faktoriaus receptorių skaičių.Tyrimas su gyvūnais parodė, kad PDGF koncentracija jaunų arklių organizme buvo didelė.Jie padarė išvadą, kad GF receptorių skaičiaus ir GF skaičiaus padidėjimas jauniems asmenims gali turėti geresnį ląstelių atsaką į gydymą PRP nei vyresnio amžiaus asmenys jauniems asmenims.Šios išvados atskleidžia, kodėl PRP gydymas gali būti mažiau veiksmingas ar net neveiksmingas vyresnio amžiaus pacientams, turintiems mažiau kamieninių ląstelių ir „prastos kokybės“.Įrodyta, kad po PRP injekcijos kremzlių senėjimo procesas yra atvirkštinis ir pailgėja chondrocitų poilsio laikotarpis.Jia ir kt.Jis naudojamas pelių odos fibroblastų fotosenėjimui in vitro tirti, gydant PRP ir be jo, siekiant išsiaiškinti PGF priešpriešinio poveikio mechanizmą šiame modelyje.PRP grupė parodė tiesioginį poveikį tarpląstelinei matricai, padidino I tipo kolageno kiekį ir sumažino metaloproteinazių sintezę, o tai rodo, kad PRP gali neutralizuoti ląstelių senėjimą, taip pat degeneracinę MSK ligą.

Kitame tyrime PRP buvo naudojamas senoms kaulų čiulpų kamieninėms ląstelėms iš senų pelių surinkti.Nustatyta, kad PRP gali susigrąžinti įvairias kamieninių ląstelių funkcijas po senėjimo, pvz., ląstelių proliferaciją ir kolonijų susidarymą, bei atkurti su ląstelių senėjimu susijusius žymenis.

Neseniai Oberlohras ir jo kolegos nuodugniai ištyrė ląstelių senėjimo vaidmenį silpninant raumenų regeneraciją ir įvertino PRP bei trombocitų neturinčią plazmą (PPP) kaip biologinio gydymo galimybes skeleto raumenų atstatymui.Jie numatė, kad PRP arba PPP gydymas skeleto raumenų atstatymui būtų pagrįstas biologiniais veiksniais, pritaikytais SASP specifiniams ląstelių žymenims, ir kitais veiksniais, lemiančiais fibrozės vystymąsi.

Galima pagrįstai manyti, kad prieš taikant PRP tikslingas ląstelių senėjimas gali pagerinti biologinio gydymo efektyvumo regeneracijos charakteristikas, sumažinant vietinius SASP veiksnius.Buvo pasiūlyta, kad dar viena galimybė pagerinti PRP ir PPP gydymo, skirto skeleto raumenų regeneracijai, rezultatus yra selektyviai pašalinti senstančias ląsteles su senstančiomis šalinančiomis medžiagomis.Neabejotina, kad naujausi tyrimų rezultatai apie PRP poveikį ląstelių senėjimui ir senėjimui yra žavūs, tačiau jie vis dar yra pradinėje stadijoje.Todėl šiuo metu neprotinga teikti kokių nors pasiūlymų.

 

 

 

 

(Šio straipsnio turinys yra perspausdintas ir mes nesuteikiame jokių aiškių ar numanomų garantijų dėl šiame straipsnyje pateikto turinio tikslumo, patikimumo ar išsamumo ir nesame atsakingi už šiame straipsnyje pateiktas nuomones, supraskite.)


Paskelbimo laikas: 2023-01-01